【包装规格】20反应/盒
【作用与用途】本试剂盒可用于猫眼、鼻、口分泌物等样品中杯状病毒核酸的检测。
【检验方法】
1. DNA提取：客户自备DNA提取试剂。（如已提取DNA请直接进行下一步扩增步骤）
2. 实验前准备
2.1实验前，取出反应液，室温融化后，涡旋混匀。
2.2 在适当容积的无菌离心管中加入上述试剂，混匀后2000 rpm 离心10 s，按照16 ul/管分装量将反应液分装至PCR八连排反应管中。
2.3 加样：
反应液分装完成后，再加入待测样本DNA模板4 ul和阴性、阳性对照，并记录加样顺序。
（注：为防止假阳性，建议在分装完成且加入待测样品DNA后添加提供的防污染液（4号溶液），防污染液添加量为每反应体系20 ul）
2.4 盖好PCR管盖后2000 rpm离心10s。
2.5 将反应管放置在荧光PCR仪样品孔中，在PCR仪上运行以下程序：
荧光通道选择FAM通道，扩增的同时采集荧光信号。设置扩增体系为20 ul。
【结果分析】
1. 试剂盒有效性判断
2.1 阳性对照：Ct≤38，有明显指数增长。
2.2 阴性对照：Ct＞38或者无Ct值，线形为直线或轻微斜线，无明显指数增长期。
2. 样本结果判定
2.1 阳性：样品检测结果在38循环内有明显扩增曲线且与阴性对照有明显差异，表明样本中检测出非洲猪瘟病毒。
2.2 可疑：样品检测结果若在38循环内出现较低的曲线或者在38-40循环出现扩增趋势，此时应对样本进行重复检测或者观察所测样本与所测阴性对照是否存在明显区别，若重复实验结果仍相同或者所测样本与阴性对照存在明显区别，则判定样本为阳性，否则为阴性。
2.3 阴性：样品检测结果在0-40循环内无扩增曲线出现，则未检出非洲猪瘟病毒。
【注意事项】
1.实验室管理应严格按照国家有关临床基因扩增实验室的管理规范执行。实验人员必须进行专业培训才可上岗；实验操作的每个阶段使用专用的仪器和设备，各区各阶段用品不得交叉使用：各区间人员流动及空气流向应有严格要求。
2.实验前请仔细阅读本试剂盒说明书，严格按操作步骤执行：不使用本试剂盒提供的组份或不按照说明书进行实验将可能导致错误结果。
3.所有试剂应在规定的温度储存。
4.操作台、移液器、离心机等仪器用品应经常用 1.0%次氯酸钠或稀盐酸擦拭消毒或浸泡。操作过程中移液、定时等全部过程必须精确。实验房间、超净工作台应定期或每次实验后用紫外灯处理。
5.使用不含荧光物质的一次性手套，并经常替换预防交叉污染。
6.本试剂盒内试剂组份及实验过程中的皮弃物在使用过程中建议按照具有潜在传染性物质处理方法进行处理。
7.为防止荧光干扰，应避免用手直接接触，请勿在PCR反应管上进行标记。
8.产生假阴性结果的可能原因：被检样品在采集、运输、储存以及核酸提取过程中操作方式不当，容易造成 DNA 降解而产生假阴性结果;
【储存条件】
1号溶液保存于-20℃冰箱，使用时取出，若溶液不为液态，应在使用前待其完全溶解，并混匀；
2号溶液保存于-20℃冰箱；
3、4号溶液保存于4℃冰箱；
注：（所有试剂如长时间不用，应于-20℃存放）
